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產(chǎn)品資料

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒

如果您對(duì)該產(chǎn)品感興趣的話,可以
產(chǎn)品名稱: 人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào): α1-AGP
產(chǎn)品展商: ELISA試劑盒
產(chǎn)品文檔: 無(wú)相關(guān)文檔

簡(jiǎn)單介紹

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人α1-AGP抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人α1-AGP與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人α1-AGP抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素??谷甩?-AGP抗體與結(jié)合在包被抗體上的人α1-AGP結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成**復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒濃度與OD450值之間呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人α1-AGP的濃度。


人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒  的詳細(xì)介紹


人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒

使用說(shuō)明書

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒基本原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人α1-AGP抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人α1-AGP與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人α1-AGP抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素??谷甩?-AGP抗體與結(jié)合在包被抗體上的人α1-AGP結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成**復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,人α1-AGP濃度與OD450值之間呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人α1-AGP的濃度。

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒描述:

英文名稱 Human α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit
中文名稱 人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)酶聯(lián)**吸附測(cè)定試劑盒
貨號(hào) X-EL-H0001c 種屬 Human/人
規(guī)格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
檢測(cè)方法 雙抗體夾心法
檢測(cè)范圍 3.125~200ng/mL 靈敏度 1.875ng/mL

試劑盒組成:

中文名稱

英文名稱

規(guī)格

保存

  ELISA酶標(biāo)板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

凍干標(biāo)準(zhǔn)品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

濃縮生物素化抗體

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化抗體稀釋液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

濃縮HRP酶結(jié)合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶結(jié)合物稀釋液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

濃縮洗滌液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反應(yīng)終止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

產(chǎn)品說(shuō)明書

Product  Description

  1 

 

質(zhì)檢報(bào)告

Certificate of Analysis

  1 

 

特別說(shuō)明
*: [96T/48T](打開包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全完整)
#: 
一周內(nèi)使用可存于4℃,需長(zhǎng)時(shí)間存放或多次使用建議存于-20.                                      

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:

1. 請(qǐng)?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過(guò)50℃,使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。 

4. 生物素化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

當(dāng)日使用。

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例:(以500μL/管為例,也可根據(jù)實(shí)際用量來(lái)稀釋,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100μL 37℃孵育90分鐘

2. 加入100μ生物素化抗體工作液,37℃孵育60分鐘

3. 洗滌3

4. 加入100μL酶結(jié)合物工作液, 37℃孵育30分鐘

5. 洗滌5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分鐘左右

7. 加入50μL終止液,立即在450nm波長(zhǎng)處測(cè)量OD

8. 結(jié)果計(jì)算

一、操作因素對(duì)ELISA結(jié)果的影響ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。以下敘述各個(gè)步驟中的影響因素。

1.加樣

2.溫育

3.洗滌

4.顯色

5.比色

二、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下,ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報(bào)告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off valueCO值),這是定性**測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。

三、標(biāo)本復(fù)查ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法,比如對(duì)HBsAgHBeAg、HCV-AbHIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。

四、結(jié)果判斷和報(bào)告常用下列幾種方法表示結(jié)果:

1.定性測(cè)定

2.半定量測(cè)定 結(jié)果一般以滴度表示。

3.定量測(cè)定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以**量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

注意事項(xiàng):

仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。

檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過(guò)有效期,請(qǐng)勿使用。

按說(shuō)明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。

標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者,注意低溫保存。

準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,(比如移液器,試管,清洗器,酶標(biāo)儀)。

按說(shuō)明書將所用試劑平衡至室溫,根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。

檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件,保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書推薦的條件存儲(chǔ)。

檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液(比如沉淀或變色)。有些試劑,比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液,可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前,必需充分混勻。而由于沉淀物的特性,在加入酶標(biāo)板之前,必需不停攪拌。

保證充分的孵育時(shí)間和溫度。

切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。

在混合或溶解蛋白溶液時(shí),避免泡沫產(chǎn)生。

在實(shí)驗(yàn)開始之前,安排好實(shí)驗(yàn)流程。

在實(shí)驗(yàn)開始之前,清潔工作臺(tái)。

若有問(wèn)題,應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒結(jié)果判斷:

1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖,如設(shè)置復(fù)孔,則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件,如curve expert 1.31.4,在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,乘以稀釋倍數(shù);亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè),計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒有效期穩(wěn)定性考察

本試驗(yàn)以α1酸性糖蛋白(α1-AGP)為例

1.        OD值:

正常保存條件下有效期內(nèi)和超過(guò)有效期2個(gè)月所測(cè)OD值比較

正常有效期內(nèi)OD值: 3.251,2.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超過(guò)2個(gè)月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分別于定值血清及血漿中加入一定量的α1酸性糖蛋白(α1-AGP)標(biāo)準(zhǔn)品,重復(fù)測(cè)定并計(jì)算其品均值,回收率為測(cè)定值與理論值的比率。

        正常保存條件下有效期內(nèi)和過(guò)有效期2個(gè)月elisa 試劑盒回收率檢測(cè)結(jié)果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       線性:分別于定值血清及血漿中加入一定量的α1酸性糖蛋白(α1-AGP)標(biāo)準(zhǔn)品,并將標(biāo)本按1:2,1:4,1:8稀釋,線性范圍即為稀釋后樣本中α1酸性糖蛋白(α1-AGP)含量的測(cè)定值與理論值的比率。

         正常保存條件下有效期內(nèi)和過(guò)有效期2個(gè)月elisa 試劑盒回線性檢測(cè)結(jié)果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以樣品測(cè)定值的變異系數(shù)CV表示。CV%=SD/meanx100

批內(nèi)差:取同一批次試劑盒對(duì)低值,中值和高值樣本進(jìn)行定量檢測(cè),每份樣本測(cè)定20次,分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值和SD值。

批間差:選取 3 個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測(cè)定, 每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)測(cè)定 8 次,分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及 SD 值。(批內(nèi)差: CV<10%;批間差: CV<11%)

       正常保存條件下有效期內(nèi)和過(guò)有效期2個(gè)月elisa 試劑盒回精密度檢測(cè)結(jié)果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法:

1. 加入反應(yīng)終止液后,沒(méi)有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶標(biāo)記物。

解決辦法:請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行。

b.原因:試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

解決辦法:確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。

c.原因:室溫太低。

解決辦法:若室溫太低(<19),請(qǐng)于操作步驟4,適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間。

d.原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法: 請(qǐng)用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因:試劑盒已過(guò)有效期限。

解決辦法:請(qǐng)更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳,或是平行性不好。

a.原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法: 請(qǐng)確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))

b.原因:操作時(shí)間拖太久。

解決辦法:請(qǐng)?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。

c.原因:微孔間相互污染。

解決辦法: 加樣品時(shí),請(qǐng)小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。

解決辦法:請(qǐng)使用已校正過(guò)的移液槍,并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法:加樣品或試劑時(shí),吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。

f.原因:洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。

解決辦法:請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板機(jī)洗板過(guò)程,洗完后立即進(jìn)行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因:室溫太高(>25)

解決辦法: 若無(wú)法降低室內(nèi)溫度,請(qǐng)適當(dāng)縮短步驟4的溫育時(shí)間。

b.原因:底物溶液受到污染。

解決辦法: 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍(lán)色,請(qǐng)不要再使用。

c.原因:反應(yīng)時(shí)間超過(guò)太久。

解決辦法:請(qǐng)控制反應(yīng)時(shí)間。

d.原因:酶標(biāo)記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法:使用過(guò)的吸頭應(yīng)立即丟棄,可避免試劑間相互污染,凡是試劑(特別是酶標(biāo)記物與底物溶液)接觸過(guò)的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡,再以清水沖洗干凈,可確保無(wú)殘留)

4. 陰性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值低于陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值。

a.原因:微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法: 試劑加完后,需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因:洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題(2-f.)。

解決辦法:請(qǐng)參考2-f.

c.原因:添加樣品或酶標(biāo)記物的量不一致。

解決辦法: 請(qǐng)參考2-d.

 

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