真核表達

真核細胞中蛋白表達比大腸柑橘復(fù)雜很多，一般會選擇分泌表達載體，以便于蛋白純化。真核表達系統(tǒng)有酵母表達系統(tǒng)、昆蟲細胞表達系統(tǒng)和哺乳動物細胞表達系統(tǒng)。步驟包括：

1. 克隆目的基因

選用合適的內(nèi)切酶把外源基因克隆于表達載體的多克隆位點。

2. 重組載體線性化

環(huán)狀質(zhì)粒的整合效率十分地，重組載體酶切線性化后整合效率會提高。不同的內(nèi)切酶線性化會得到不同的轉(zhuǎn)化子。

3. 轉(zhuǎn)化

目前真核細胞的轉(zhuǎn)化方法有很多種，例如鋰鹽法；PEG法，原生質(zhì)球法；電穿孔法等。一般會選用原生質(zhì)球或電擊法。

4. 篩選

可先在不含組氨酸的培養(yǎng)基上篩選，然后再PCR篩選。大量轉(zhuǎn)化子的篩選，則可用原為點雜交進行。

5. 鑒定表型和誘導表達

外源蛋白的表達在真核細胞中分兩步，即菌體生長和蛋白誘導表達。先在培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌體，達到一定的OD值后，誘導表達。