菌體內(nèi)****劑使用說明書
英文名稱:Bacterial Endotoxin Erasol
產(chǎn)品及特點(diǎn)
內(nèi)**(即lipopolysaccharides,LPS)是E.coli細(xì)胞壁的主要成分,傳統(tǒng)的去除內(nèi)**的方法是將內(nèi)**和DNA一起純化出來,然后再用各種方法去除其中的內(nèi)**,操作繁瑣,DNA回收率低。本產(chǎn)品可以直接把E.coli表面的內(nèi)**去除,從根本上避免了內(nèi)**對后續(xù)操作(如質(zhì)粒DNA提取,重組蛋白質(zhì)提?。┑奈廴?。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 頭個(gè)在菌體收集階段去除內(nèi)**的產(chǎn)品,從源頭上避免了內(nèi)**跟DNA和胞漿蛋白的接觸,從根本上防止了可能產(chǎn)生的污染。
2. 操作簡單快速,用酶溶液溫和清洗菌體3-4次即可去掉**表面的內(nèi)**,只需要10分鐘左右時(shí)間,不需要復(fù)雜儀器設(shè)備。
3. 高效,能去除99%以上的內(nèi)**。
4. 跟各種質(zhì)粒DNA提取、基因組DNA提取和蛋白質(zhì)提取等操作兼容,DNA丟失率只有10%左右(其他方法DNA丟失率可以高達(dá)50%)。
5. 不影響DNA和絕大部分蛋白質(zhì)的活性,處理過的質(zhì)粒DNA可用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
6. 既可小規(guī)模使用(在1.5 mL離心管內(nèi)),也可放量用于大規(guī)模無內(nèi)**質(zhì)粒DNA提取和無內(nèi)**蛋白質(zhì)純化。
規(guī)格及成分
成 份
編 號
200 mL包裝
本產(chǎn)品
90901
200 mL
使用手冊
90901sc
1份
運(yùn)輸及保存
常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。
自備試劑
無
使用方法
一:用于菌液小于3 mL的樣品
1. 收集1.5-3 mL E.coli飽和菌液,12,000 rpm離心1分鐘,棄上清,得到**沉淀。
2. 加入1 mL本產(chǎn)品溫和混勻后10,000-12,000 rpm離心1分鐘,棄上清(含內(nèi)**)。
3. 再重復(fù)上述操作3-4次,得到的菌體可以直接進(jìn)入后續(xù)的無內(nèi)**質(zhì)粒DNA提取或無內(nèi)**蛋白質(zhì)提取程序。
二:用于菌液多于3 mL的樣品
整個(gè)操作同上,只是在15或50 mL 塑料離心管中進(jìn)行,離心速度不能超過離心管的承受力,本產(chǎn)品的用量按比例增加。
常見問題
Q:為何用常規(guī)的方法很難去除生物樣品中的內(nèi)**?
A:因?yàn)閮?nèi)**帶電性跟DNA和部分蛋白質(zhì)相同,所以基于帶電性的分離方法(如硅膠膜吸附,離子交換吸附)不能將它們分開;同時(shí)內(nèi)**又是雙性分子(類似于細(xì)胞膜的磷脂分子),能夠形成大小不等的聚合物,跟質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)大小接近,所以基于分子量大小的分離方法(如凝膠排阻過濾和氯化銫超速離心)也不能將其有效分離。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品
固相內(nèi)****劑(CAT#:60608)
背景資料
內(nèi)**的分子結(jié)構(gòu)
外**vs.內(nèi)**
區(qū)別要點(diǎn)
外**(Exotoxin)
內(nèi)**(Endotoxin)
存在部位
由活的**釋放至**體外,為**的代謝產(chǎn)物
為**細(xì)胞外壁結(jié)構(gòu)成份,細(xì)胞破裂后釋出
**種類
以革蘭氏陽性菌多見
革蘭氏陰性菌多見
化學(xué)特性
蛋白質(zhì)(分子量27~900 KDa),易被分解破壞,熱不穩(wěn)定(60℃以上能迅速破壞)
磷脂一多糖一蛋白質(zhì)復(fù)合物(毒性主要為類脂A),不易被分解破壞,耐熱(60℃耐受數(shù)小時(shí))
毒性作用
強(qiáng),微量對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有致死作用(以ug計(jì)量)。各種外**有選擇作用,引起特殊病變,不引起宿主發(fā)熱反應(yīng)。抑制蛋白質(zhì)合成,有細(xì)胞毒性、神經(jīng)毒性、紊亂水鹽代謝等
稍弱,對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致死作用的量比外**為大。各種**內(nèi)素的毒性作用大致相同。引起發(fā)熱、彌漫性血管內(nèi)凝血、粒細(xì)胞減少血癥、施瓦茲曼現(xiàn)象等
抗原性
強(qiáng),可刺激機(jī)體產(chǎn)生高效價(jià)的抗**。經(jīng)甲醛處理可脫毒成為類毒霉,仍有較強(qiáng)的抗原性,可用于人工自動(dòng)**
弱,刺激機(jī)體對多糖成份產(chǎn)生抗體,不形成抗**,不能經(jīng)甲醛處理成為類**而使毒性消失
其他
幾乎無發(fā)熱性,對腫瘤細(xì)胞無影響
很強(qiáng)的發(fā)熱性,破壞腫瘤細(xì)胞
例子
白喉**,肉毒**,破傷風(fēng)*******,溶血性鏈球菌**等
大腸桿菌,霍亂綠膿菌,沙門氏菌,赤痢菌等。