如何制備單克隆抗體

單克隆抗體，是單個(gè)B**細(xì)胞同骨髓腫瘤細(xì)胞雜交，產(chǎn)生的針對(duì)單一抗原決定簇的抗體，并且該雜種細(xì)胞能無(wú)限的繁殖。主要原理是：B**細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限分裂，腫瘤細(xì)胞在體外能夠無(wú)限分裂，但不能產(chǎn)生抗體，將兩種細(xì)胞融合后具有兩種細(xì)胞的特性。

其制備的主要步驟包括：

1. 抗原制備

**抗原越純?cè)胶?，一般如果抗原的?lái)源有限，或性質(zhì)不穩(wěn)定，提純時(shí)易變性，或**原性很強(qiáng)，**用的抗原只需初步提純甚至不提純，但如果抗原中混雜物很多，則需對(duì)抗原進(jìn)行純化。

2. **動(dòng)物

用目的抗原**動(dòng)物，使細(xì)胞產(chǎn)生B**細(xì)胞。根據(jù)所用的骨髓瘤細(xì)胞可選用小鼠和大鼠作為**動(dòng)物。小鼠骨髓瘤細(xì)胞系來(lái)源于BALB/c小鼠，大鼠骨髓瘤細(xì)胞來(lái)源于LOU/c大鼠。 如小鼠，一般以8-12周齡的雌鼠為宜。

3. 細(xì)胞融合

將**細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞按一定的比例混合，并加入促融合劑（PEG），使各種**細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞

4. 雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)

目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基， A（氨基蝶呤），HT(次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷)。篩選出融合的雜交瘤細(xì)胞，在HAT培養(yǎng)基中存貨和增殖，未融合的骨髓瘤細(xì)胞和**細(xì)胞將逐漸死亡。

5. 雜交瘤細(xì)胞的篩選及克隆化

篩選即把分泌所需的抗體的雜交瘤孔從眾多孔中選出來(lái)，也稱(chēng)為抗體檢測(cè), 方法有**酶技術(shù)和**熒光技術(shù)等?？寺』侵甘箚蝹€(gè)細(xì)胞無(wú)性繁殖而獲得該細(xì)胞團(tuán)體的整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程，在得到**的抗原雜交瘤后需進(jìn)行2-3次克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。

6. 單克隆抗體的鑒定

單克隆性的確定，包括雜交瘤細(xì)胞的染色體分析、單抗**球蛋白重鏈和輕鏈的鑒定和單抗純度鑒定。單克隆理化特性的鑒定。單抗與相應(yīng)抗原的反應(yīng)性測(cè)定。

7. 單克隆抗體的大量制備

有動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。