ELISA試劑盒樣本與實(shí)驗(yàn)的重要性

ELISA試劑盒樣本與實(shí)驗(yàn)的重要性

ELISA試劑盒即酶聯(lián)**吸附法，是一種常用的固相酶**測(cè)定方法。因?yàn)镋LISA方法簡(jiǎn)略，便當(dāng)，活絡(luò)，特異性強(qiáng)且不需求特別設(shè)備（只需求酶標(biāo)儀就可以），所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。
但是影響ELISA測(cè)定的要素有許多，而其操作中需求有一定的技術(shù)請(qǐng)求，如操作方法，環(huán)境，樣本等，有時(shí)?？梢姷揭恍┻^錯(cuò)效果（即假陽(yáng)性或假陰性）等，樣本的重要性關(guān)系到全部實(shí)驗(yàn)的效果，上海極威生物為我們解讀ELISA查看的影響要素之一-樣本的影響
1、ELISA試劑盒樣本的保存：在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)致使本底過深、會(huì)構(gòu)成假陽(yáng)性；為避免上述問題，在測(cè)定血清標(biāo)本時(shí)*佳能新鮮搜集；假如不能當(dāng)即測(cè)定，根據(jù)相應(yīng)的時(shí)間保存相應(yīng)的溫度，5 d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)-20℃低溫凍存；如凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)有些濃縮，分布不均，應(yīng)充沛混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可激烈振蕩。
2、樣本的時(shí)間：因?yàn)樗芰显嚬苣芪娇乖镔|(zhì)，所以樣本長(zhǎng)時(shí)間放在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降構(gòu)成假陰性。*佳的方法是運(yùn)用真空采血管；并運(yùn)用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
3、樣本受**污染：因菌體中可能會(huì)含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被**污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本相同，可能會(huì)發(fā)作非特異性顯色而攪擾測(cè)定效果。
4、ELISA試劑盒樣本的凝聚：樣本凝聚不全。在實(shí)驗(yàn)中，有的時(shí)分心急為了爭(zhēng)取時(shí)間快速查看，在血液還未初步凝聚的時(shí)分就強(qiáng)行離心分別血清，致使血清中仍殘留有些纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊，易構(gòu)成假陽(yáng)性效果；因此血液標(biāo)本搜集后有必要使其充沛凝聚后再分別血清。
5、ELISA試劑盒樣本溶血：溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清選用ELISA法查看易發(fā)作假陽(yáng)性?？赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗刷過程中往往難以完全洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），然后催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，發(fā)作假陽(yáng)性［2］。所以嚴(yán)峻溶血標(biāo)本禁用。

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