DNA提取 ：一、口腔采樣拭子實(shí)驗(yàn)原理

DNA是遺傳信息的載體，是*重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來(lái)源的樣品（如**、**、血液、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織等）中提取高純度基因組DNA的服務(wù)。

二、實(shí)驗(yàn)步驟    

1、細(xì)胞裂解   

● CTAB法    CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基**基溴化銨）是一種陽(yáng)離子去污劑，可融解細(xì)胞膜，并與核酸形成符合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7M NaCl）是可溶的，口腔采樣拭子通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。此法多用于植物組織、**等材料。   

● SDS法    SDS是一種陰離子去污劑，高溫（55℃-65℃）下可裂解細(xì)胞，使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等樣品基因組DNA的提取。    

● 其他方法    物理方法如機(jī)械剪切、超聲波破碎、勻漿等，化學(xué)方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。

2、DNA分離純化    

● 用酚/氯仿抽提裂解液，收集水相，乙醇沉淀DNA，*后用TE溶解DNA沉淀。    

3、DNA的定量及檢測(cè)   

● 口腔采樣拭子瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA片段的分子質(zhì)量。    

● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度    DNA在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度＝OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。   

● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA純度   

一般用OD260/OD280值檢測(cè)DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9，說(shuō)明DNA純度較好；若小于1.7有可能有蛋白污染；若大于2.0，說(shuō)明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。

三、口腔采樣拭子樣品處理

因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含成分不同，樣品預(yù)處理的方法也有差異。不同樣品的預(yù)處理方法大致如下：  

● 植物組織——液氮研磨    

● 動(dòng)物組織——?jiǎng)驖{、液氮研磨    

● 培養(yǎng)細(xì)胞——蛋白酶K消化    

● 細(xì)    菌——溶菌酶消化    

● 酵    母——Lyticase消化、玻璃珠破碎   

口腔采樣拭子注意：客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍保存的樣品，避免反復(fù)凍溶。

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