即用型LB平板培養(yǎng)基各種不同類型的細胞為了在即使進行了好幾輪的分裂后也能保持其特征,每個細胞都必須“牢記”哪些基因在分裂前是激活的并將這些記憶傳遞給子細胞。細胞通過一種“書簽”過程來應對這種挑戰(zhàn)。便利貼能在書本中標出*后閱讀的頁碼,用同樣的方式,特定的分子在細胞中對激活的基因進行標記,從而在分裂后,相同的基因在新細胞中能立即重新激活。 “不過,我們之前所不知道的是,分裂前被標記的基因是如何在分裂后重新激活的,”冷泉港實驗室的David L. Spector教授說。通過觀察和測定一個細胞在分裂前其中的單個基因位點(基因特定的染色體位置)的激活動力學,并與在新的子細胞中相同基因重新激活的動力學進行比較,Spector和他的團隊現(xiàn)在得到了問題的答案。他們的研究結果發(fā)表在10月9號的《Nature Cell Biology 》上。
即用型LB平板培養(yǎng)基在細胞分裂或有絲分裂過程中,細胞重所有基因的活性出現(xiàn)暫時的中斷。細胞的染色質——纏繞在組蛋白(折疊DNA的蛋白質)上的染色體DNA——變得非常緊湊;大多數(shù)在通常情況下粘附在染色質上以保持基因表達的蛋白質被剝離開;轉錄——DNA拷貝成為RNA的過程——停止。當分裂結束后,染色質在新的細胞中重新壓縮或散開,轉錄調節(jié)蛋白進入到染色質的特定位點,基因開始一輪的轉錄。
一,即用型LB平板培養(yǎng)基蛋白芯片技術的基本原理 蛋白芯片技術的基本原理是將各種蛋白質有序地固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上成為檢測用的芯片,然后,用標記了特定熒光**素體的蛋白質或其他成分與芯片作用,經(jīng)漂洗將未能與芯片上的蛋白質互補結合的成分洗去,再利用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術,測定芯片上各點的熒光強度,通過熒光強度分析蛋白質與蛋白質之間相互作用的關系,由此達到測定各種蛋白質功能的目的。為了實現(xiàn)這個目的,首先必須通過一定的方法將蛋白質固定于合適的體上,同時能夠維持蛋白質天然構象,也就是必須防止其變性以維持其原有特定的生物活性。另外,即用型LB平板培養(yǎng)基由于生物細胞中蛋白質的多樣性和功能的復雜性,開發(fā)和建立具有多樣品并行處理能力、能夠進行快速分析的高通量蛋白芯處技術將有利于簡化和加快蛋白質功能研究的進展。
二,生成鹽復合物沉淀法 1.金屬復合鹽法 許多有機物質包括蛋白在內,在堿性溶液中帶負電荷,能與金屬離子形成沉淀。根據(jù)有機物與它們之間的作用機制,可分為羧酸、胺及雜環(huán)等含氮化合物類,如銅鋅鎘;親羧酸疏含氮化合物類,如概鎂鉛;親硫氫基化合物類,如汞銀鉛。蛋白質-金屬離子復合物的重要性質是它們的溶解度對溶液的介電常數(shù)非常敏感,調整水溶液的介電常數(shù)(如加入有機溶劑),即可沉淀多種蛋白。 2. 有機鹽法 含氮有機酸如苦味酸、苦酮酸、鞣酸等能與有機分子的堿性功能團形成復合物而沉淀析出。但此法常發(fā)生不可逆的沉淀反應,故用于制備蛋白質時,需采用較溫和的條件,有時還需加入一定的穩(wěn)定劑。 3.無機復合鹽法 如磷鎢酸鹽、磷鉬酸鹽等。 即用型LB平板培養(yǎng)基以上鹽類復合物都具有很低的溶解度,極易沉淀析出。若沉淀為金屬復合鹽,可通以H2S使金屬變成硫化物而除去,若為有機酸鹽或磷鎢酸鹽,則加入無機酸并用乙醚萃取,把有機酸和磷鎢酸等移入乙醚中除去,或用離子交換法除去。值得注意的是此類方法常使蛋白質發(fā)生不可逆沉淀,應用時必須謹慎。