泰樂菌素試劑盒
產(chǎn)品介紹
【原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物泰樂菌素與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭其抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含泰樂菌素的含量成負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出殘留物泰樂菌素的含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.5ppb
檢測時間： 45min
泰樂菌素試劑盒樣本檢測下限：
組織………………………………3ppb
蜂蜜 ……………………………1.5ppb
血清………………………………10ppb
牛奶………………………………10ppb
樣本回收率
組織……………………………85±10%
蜂蜜……………………………85±15%
交叉反應(yīng)率：
泰樂菌素 ……………………… 100%
紅霉素……………………………1%
與其他大環(huán)內(nèi)酯類**交叉反應(yīng)小于1%
試 劑 盒 組 成
1、微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、標(biāo) 準(zhǔn) 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、 0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、 13.5ppb、 40.5ppb
3、酶標(biāo)記物 7ml …………………………… 紅色帽
4、抗體工作液 7ml ……………………………… 綠色帽
5、底物A液 7ml ………………………………棕色帽
6、底物B液 7 ml………………………………黑色帽
7、終止液 7 ml ………………………………黃色帽
8、2X濃縮復(fù)溶液 50 ml…………………………藍色帽
9、20X濃縮洗滌液 40ml……………………… 白色帽
10、使用說明書………………… …………………1份
泰樂菌素試劑盒【所用儀器、試劑】
（1）設(shè)備：
微孔板酶標(biāo)儀(450nm)、振蕩器、離心機、微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl 、容量瓶：100ml，500ml，1000ml
（2）試劑
氫氧化鈉、甲醇、濃HCl、乙腈、三氯甲烷
泰樂菌素試劑盒【實驗前溶液配制】
配液1：0.1M NaOH : 0.4gNaOH 加去離子水100ml溶解
配液2：樣本提取液（乙腈-0.1M HCl）—甲醇溶液:將乙腈84ml+0.1MHCl 16ml混合，再加入18ml甲醇混合。
配液3：復(fù)溶工作液2X復(fù)溶液在使用前請按1：1稀釋（1份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）
配液4：洗滌液將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用蒸餾水稀釋20×濃縮洗滌液在使用前請按1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水）（可按需配置）
【樣本前處理步驟】
樣本前處理須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
樣本前處理方法
（A）肌肉、肝臟樣本 （樣本稀釋倍數(shù)2）
1、 用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；
2、 稱取2±0.05g樣本于50ml離心管中，加入8ml樣本提取液，用振蕩器振蕩5分鐘；4000轉(zhuǎn)/分以上,室溫離心10分鐘；
3、 取上清液2ml，加入0.1M NaOH溶液1ml,混合后加入 3ml三氯甲烷萃取，振蕩器上振蕩5分鐘；
4、 4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫離心10分鐘。去除上層相，取下層全部有機相至干凈玻璃試管中，于56℃水浴下氮氣/空氣吹干；
5、 用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥后的殘留物，混合30s；
6、 取50ul用于分析。
（B）蜂蜜樣本（樣本稀釋倍數(shù)1）
1、 稱取1±0.05g樣本于50ml離心管中，加2ml去離子水渦動2分鐘使其溶解，再加入10ml三氯甲烷上下振蕩5分鐘；
2、 4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫離心10分鐘。去除上層相，取下層全部有機相至干凈玻璃試管中，于56℃水浴下氮氣/空氣吹干；用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥后的殘留物，混合30s；
3、 取50ul用于分析。
（C） 血清樣本 (樣本稀釋倍數(shù)：20倍)
1、將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清；
2、取50μl血清，加入950μl稀釋后的復(fù)溶液混合，混合30s；
3、取50μl液體用于分析。
（b）牛奶
1、取1ml牛奶樣本于離心管中，在3000r/min，4℃離心10min，去除上層脂肪。
2、取50ul上清液，加入950ul 稀釋后的復(fù)溶液混勻，混合30s。
3、取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：20倍
【酶標(biāo)**分析程序】
泰樂菌素試劑盒操作步驟：
1、 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl /孔，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境避光反應(yīng)30分鐘。
5、 洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加洗滌液 250μl/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗滌4－5次，用吸水紙拍干。
6、顯色：每孔先各加入底物液A 50μl，再各加入底物液B 50μl，輕輕晃蕩混勻，并在25℃下避光反應(yīng)15分鐘。
7、讀數(shù)：每孔各加50μl終止液，在酶標(biāo)儀于450nm處測定OD值（建議用450/630nm雙波長檢測，在5分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與泰樂菌素的含量成負相關(guān)。
1、粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng /ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值0.241，樣本2的吸光度值為0.785，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.260；0.5ppb為1.640；1.5ppb為1.234；4.5ppb為0.680； 13.5ppb為0.348；40.5ppb為0.125。則樣本1的濃度范圍是13.5ppb-40.5ppb；樣本2的濃度范圍是1.5ppb-4.5ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中泰樂菌素實際含量。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即：
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以泰樂菌素濃度（ng /ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中泰樂菌素實際含量。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索?。?/span>
3、 標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
(ppb) [μg/kg]
圖1：泰樂菌素檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
(ppb) [μg/kg]
圖2：泰樂菌素檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出泰樂菌素檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)泰樂菌素濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項】
1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一
步操作。
3、混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。