磺胺對(duì)甲氧嘧啶試劑盒
產(chǎn)品介紹
【原理】
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物磺胺對(duì)甲氧嘧啶與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗磺胺的抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含磺胺對(duì)甲氧嘧啶的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出殘留物磺胺對(duì)甲氧嘧啶的含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度：0.2ppb
檢測(cè)時(shí)間： 45min
磺胺對(duì)甲氧嘧啶試劑盒樣本檢測(cè)下限：
組 織 （高檢測(cè)限方法）……………………………0.2ppb
組 織 （低檢測(cè)限方法）……………………………1ppb
蜂 蜜…………………………………………………0.2ppb
血 清 、 尿 液 ………………………………………0.8ppb
牛 奶……………………………………………… 4ppb
樣本回收率：
組 織 、 蜂 蜜 ……………………………… 85% ±25%
尿樣、牛奶、血清………………………… 70% ±20%
交 叉 率 ：
磺胺對(duì)甲氧嘧啶………………………………100 %
【試劑盒組成】
1． 微量測(cè)試孔：每條8孔，一板12條
2． 標(biāo) 準(zhǔn) 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.2ppb、0.6pb、 1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb
3． 酶標(biāo)記物 7ml ……………………… 紅色帽
4． 抗體工作液 7ml ……………………… 綠色帽
5． 底物A液 7ml ……………………… 棕色帽
6． 底物B液 7 ml ……………………… 黑色帽
7． 終止液 7 ml …..…………………… 黃色帽
8． 20X濃縮洗滌液40 ml …………………白色帽
9． 2X濃縮復(fù)溶液 50 ml ………………… 藍(lán)色帽
磺胺對(duì)甲氧嘧啶試劑盒【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：?jiǎn)蔚?0μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl
試 劑：乙酸乙酯、正己烷、Na2HPO4·12H2O、NaOH NaH2PO4·2H2O、濃HCL、二氯甲烷
【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】
配液1、0.2M NaOH溶液稱(chēng)取0.8gNaOH用去離子水100ml溶解。
配液2、0.5M鹽酸溶液4.3ml濃HCL加入去離子水定容至100ml混勻。
配液3、0.02M PB緩沖液稱(chēng)取2.58g Na2HPO4·12H2O和0.44g NaH2PO4·2H2O加去離子水500ml溶解。
配液 4、乙腈-二氯甲烷混合溶液V乙腈-V二氯甲烷 = 1 : 4
配液5、樣本復(fù)溶液：將2×濃縮復(fù)溶液用去離子水以1：1?。?份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水），用于樣本提取后的復(fù)溶。
配液6、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照 1：19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
【樣本前處理步驟】
磺胺對(duì)甲氧嘧啶試劑盒樣本前處理須知
處理任何樣本時(shí)，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測(cè)的組織樣本包括：動(dòng)物組織、禽類(lèi)和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚(yú)、蝦等。
（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（a ）組織高檢測(cè)限處理方法一：
1、稱(chēng)2.0±0.05g均質(zhì)過(guò)的組織樣本于50ml離心管中；加入乙腈-二氯甲烷混合溶液8ml，振蕩2min，4000r/min以上，15℃離心10min；
2、取4ml上層清澈有機(jī)相至干燥溶器中，56℃氮?dú)獯蹈?旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；
3、用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，加入正己烷1ml混合30s，4000r/min以上，15℃離心5min；
5、去除上層取下層50μl液體用于分析
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
（b）組織高檢測(cè)限處理方法二：
1、稱(chēng)取3±0.05g勻漿物置離心管中，先加入3ml0.02M PB緩沖液充分振蕩混勻，再加入4ml乙酸乙酯和2ml乙腈，充分振蕩10min，于15℃，4000r/min以上速度離心10min；
2、移取2ml上層液體（約相當(dāng)于1g的樣本）在50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?
3、加入1ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加入1ml稀釋后的復(fù)溶液強(qiáng)烈振蕩1min，室溫 4000r/min，離心5min，除去上層液；
4、取50μl下層用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
注：在使用國(guó)家規(guī)定*高殘留限量（100ppb）進(jìn)行判定時(shí)，需進(jìn)行5倍稀釋?zhuān)?份樣本液+4份已稀釋好的復(fù)溶液）。
（c） 組織低檢測(cè)限處理方法
1、稱(chēng)取2.0±0.05g均質(zhì)過(guò)的組織樣本于50ml離心管中；加入8ml0.02M PB緩沖液，充分振蕩2min，于15℃，4000r/min以上速度離心10min
2、取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：5倍
（d） 血清樣本
1、將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過(guò)濾血清；
2、 取1ml血清，加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合，混合30s；
3、 取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4倍
（e）蜂蜜
1、 稱(chēng)取1±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中，加入1ml0.5M鹽酸 置于37℃環(huán)境中30min；
2、 加入2.5ml 0.2M 氫氧化鈉 (將PH值調(diào)至5左右)再加入4ml乙酸乙脂振蕩5min，4000r/min以上室溫離心10min；
3、 取2ml上層液體于50℃下氮?dú)獯蹈桑?.5ml 已稀釋好的復(fù)溶液復(fù)溶，混合30s；
4、 取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
（f）尿液
1、 用3ml0.02 MPB緩沖液與1ml經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合，混合30s；
2、 取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4倍
（g）牛奶
1、取1ml牛奶樣本用0.02 MPB緩沖液按1︰19（v/v）稀釋?zhuān)?0μl牛奶+380μl0.02 MPB緩沖液），混合30s；
2、取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：20倍
【酶標(biāo)**分析程序】
磺胺對(duì)甲氧嘧啶試劑盒操作步驟：
1、 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl /孔，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反
應(yīng)30min。
5、 取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、 顯色：每孔加入底物液A液50μl再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。
7、 測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)在5min內(nèi)讀完數(shù)
據(jù)），測(cè)定吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與磺胺對(duì)甲氧嘧啶的含量成負(fù)相關(guān)。
1、 粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng /ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.221，樣本2的吸光度值為0.795，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.81；0.2ppb為1.50；0.6ppb為1.114；1.8ppb為0.660； 5.4ppb為0.318；16.2ppb為0.145。則樣本1的濃度范圍是5.4ppb-16.2ppb；樣本2的濃度范圍是0.6ppb-1.8ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺對(duì)甲氧嘧啶實(shí)際含量。
2、 定量分析
（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即：
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以磺胺對(duì)甲氧嘧啶濃度（ng /ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺對(duì)甲氧嘧啶實(shí)際含量。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?b>
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
0.2 0.6 1.8 5.4 16.2
(ppb) [μg/kg]
圖1：磺胺對(duì)甲氧嘧啶檢測(cè)試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 0.2 0.6 1.8 5.4 16.2
(ppb) [μg/kg]
圖2：磺胺對(duì)甲氧嘧啶檢測(cè)試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出磺胺類(lèi)藥檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)磺胺類(lèi)藥濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行
下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲(chǔ)存】
原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。