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產(chǎn)品名稱: RNAeasy?動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)
產(chǎn)品型號:
產(chǎn)品展商: XYbscience
產(chǎn)品文檔: 無相關(guān)文檔
簡單介紹
RNAeasy?動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)是一種基于離心柱法從動物組織或培養(yǎng)的動物細(xì)胞中**、快速、便捷、穩(wěn)定、高效、高質(zhì)量地抽提長度大于200個核苷酸(nucleotide, nt)的RNA的試劑盒。抽提獲得的大于200個核苷酸的RNA(也常被稱為總RNA)可以用于各種常規(guī)用途。RNAeasy?動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)
RNAeasy?動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)
的詳細(xì)介紹
RNAeasy?動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)
產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品包裝
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產(chǎn)品價格
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XY0027
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RNAeasy?動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)
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200次
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1399.00元
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離心柱式RNAeasy?動物RNA抽提試劑盒(RNAeasy? Animal RNA Isolation Kit with Spin Column)是一種基于離心柱法從動物組織或培養(yǎng)的動物細(xì)胞中**、快速、便捷、穩(wěn)定、高效、高質(zhì)量地抽提長度大于200個核苷酸(nucleotide, nt)的RNA的試劑盒。抽提獲得的大于200個核苷酸的RNA(也常被稱為總RNA)可以用于各種常規(guī)用途。
本試劑盒抽提得到的RNA可用于反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、qPCR、Northern、點雜交(Dot Blot)、純化mRNA、體外翻譯、RNase protection assay、cDNA克隆等下游實驗;也可用于基因表達(dá)芯片分析(microarray)、高通量測序(high throughput
sequencing)等對RNA質(zhì)量要求較高的情況。
三款離心柱式及Trizol法RNA抽提試劑盒的主要特點和差異如下:
產(chǎn)品編號
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XY0024/ XY0026/
XY0027
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XY0028
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XY0032
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XY0011/XY0016
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產(chǎn)品名稱
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RNAeasy?動物RNA
抽提試劑盒
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RNAeasy?動物小RNA
抽提試劑盒
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RNAeasy? Plus動物RNA
抽提試劑盒
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Beyozol Trizol
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推薦指數(shù)
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★★★★★
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★★★★★
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★★★
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★★
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抽提方式
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離心柱式
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離心柱式
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離心柱式
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原始方式
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抽提產(chǎn)物
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RNA(>200nt)
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小RNA(<200nt)
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總RNA(含<200nt的小RNA)
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總RNA(含<200nt的小RNA)
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操作時間
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*短(15-20分鐘)
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稍較長(20-25分鐘)
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較長(25-30分鐘)
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*長(45-60分鐘)
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操作步驟
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4步驟(少)
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6步驟(多)
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6步驟(多)
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很多步驟
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使用便捷性
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★★★★★
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★★★★
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★★★★
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★★
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推薦細(xì)胞量/得率
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50-100萬/5-20μg
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50萬/1-2μg
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50-100萬/5-20μg
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50-100萬/5-20μg
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推薦組織量/得率
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5-20mg/10-40μg (多)
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5mg/1-1.5μg (少)
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3-5mg/3-10μg (少)
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50mg/100-500μg (很多)
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RNA純度
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高
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高
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高
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高
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有毒有害試劑
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無
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無
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無
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有
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人體與環(huán)境**
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高
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高
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高
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低
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國外同類產(chǎn)品
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RNeasy Mini
Kit (Qiagen)
PureLink® RNA Mini Kit
(Thermo)
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PureLink® miRNA Isolation Kit (Thermo)
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miRNeasy Mini
Kit (Qiagen)
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TRIzol
(Thermo)
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用途
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非小RNA相關(guān)各種用途
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小RNA相關(guān)各種用途
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不同長度RNA各種用途
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不同長度RNA各種用途
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動物組織或細(xì)胞中的RNA按照長度可以分為長鏈RNA(long RNA)和小RNA(small RNA),長鏈RNA通常大于200nt,而小RNA通常小于200nt。長鏈RNA按照是否編碼蛋白或多肽可以分為長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非編碼的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived
small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。
本試劑盒抽提RNA的基本流程如圖1所示。樣品在裂解液中迅速裂解,釋放出總RNA,然后讓RNA特異性地結(jié)合到純化柱上,而基因組DNA和蛋白質(zhì)等其它組分通過高速離心被有效去除,再通過3次洗滌充分去除非特異性結(jié)合的蛋白、鹽等雜質(zhì),*后用洗脫液將高純度的RNA洗脫下來。
圖1. 離心柱式RNA抽提流程示意圖
本試劑盒使用**。本試劑盒通過特殊的柱純化介質(zhì)進(jìn)行RNA分離純化,能有效避免傳統(tǒng)的Trizol法抽提時使用的酚、氯仿等有毒有害有機試劑。
本試劑盒使用快速、便捷。本試劑盒采用柱純化,無需繁瑣的RNA沉淀步驟,抽提操作過程僅15-20分鐘。相比于傳統(tǒng)的Trizol抽提法,本試劑盒的操作流程顯著簡化,縮短了抽提時間,降低了RNA被降解的風(fēng)險。和國外同類柱純化產(chǎn)品相比,所需操作步驟和操作時間基本一致。
本試劑盒抽提RNA的得率高,優(yōu)于國外同類產(chǎn)品。本試劑盒的抽提效果經(jīng)反復(fù)測試,100萬個HeLa細(xì)胞能抽提得到約15-20μgRNA,20mg小鼠肝組織能抽提得到約25-35μgRNA,20mg小鼠腦組織中抽提得到約10-20μgRNA(新鮮樣品的得率高于凍存樣品)。本試劑盒與傳統(tǒng)的Trizol方法及國際知名Q品牌同類產(chǎn)品的抽提效果對比參見圖2。
本試劑盒抽提得到的RNA純度高,顯著優(yōu)于Trizol和國外Q品牌的同類產(chǎn)品。本試劑盒抽提得到的RNA的A260/A280通常為2.0-2.2。A260/A230通常為1.9-2.1。本試劑盒與傳統(tǒng)的Trizol方法及國際知名Q品牌同類產(chǎn)品的抽提效果對比參見圖2。由圖2可知,本試劑盒在抽提組織樣品的RNA時,A260/A230非常顯著地高于Trizol法和Q品牌的同類產(chǎn)品,提示純度高。
圖2. 本試劑盒與Trizol、Q品牌同類產(chǎn)品的RNA抽提效果對比。樣品為凍存的50萬個HeLa細(xì)胞、20mg小鼠肝組織和20mg小鼠腦組織。洗脫液用量均為40μl。均取6μl洗脫的樣品經(jīng)變性處理后,在含6.67%甲醛和適量NA-Red的1.2%變性瓊脂糖凝膠中電泳約45分鐘后拍照。實際抽提效果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異,本圖僅供參考。
注:純的RNA其A260/A280約為2.0,但在很多儀器上測定時會高于2.0,低于1.9通常認(rèn)為有蛋白、DNA或者酚等的污染;純的RNA其A260/A230約為2.0左右或者略高,低于1.9通常認(rèn)為有碳水化合物、胍鹽、多肽或酚等的污染。
本產(chǎn)品與Qiagen公司的RNeasy Mini Kit一致,用于純化200nt以上的RNA,對小于200nt的small
RNA即小RNA(如5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、miRNA、piRNA等)被選擇性地去除,如果希望抽提得到小于200nt的小RNA,推薦使用的
RNAeasy?動物小RNA抽提試劑盒(離心柱式)(XY0028)或RNAeasy? Plus動物RNA抽提試劑盒(離心柱式)(XY0032)。
本試劑盒適用于新鮮或凍存的動物組織或細(xì)胞RNA的抽提,推薦的細(xì)胞用量為50-100萬(上限可達(dá)1000萬),組織用量為15-20mg(上限可達(dá)30mg)。對于不同的組織或細(xì)胞上限會有所差別,例如小鼠肝臟組織的上限可達(dá)30mg,但肌肉組織的上限為20mg。
本試劑盒可用于200個樣品的RNA抽提。
包裝清單:
產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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包裝
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XY0027-1
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裂解液
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125ml
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XY0027-2
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結(jié)合液
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125ml
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XY0027-3
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洗滌液I
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125ml
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XY0027-4
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洗滌液II
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125ml×2
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XY0027-5
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洗脫液
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15ml
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XY0027-6
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RNA純化柱及廢液收集管
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200套
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XY0027-7
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RNA洗脫管
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200個
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說明書
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1份
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保存條件:
室溫保存,一年有效。
注意事項:
對于富含RNase的樣品(如動物組織),建議使用前在裂解液中添加二硫蘇糖醇(Dithiothreitol, DTT)至終濃度為40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M
DTT)或β-巰基乙醇至終濃度為1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巰基乙醇)。含DTT或β-巰基乙醇的裂解液可在室溫放置1個月。
通過本試劑盒抽提到的RNA已經(jīng)去除絕大多數(shù)DNA,通常情況無需DNase處理。后續(xù)如進(jìn)行某些對極少量DNA殘留較敏感的實驗時,可以在使用說明中步驟4離心后,在純化柱中加入適量DNase I (如80μl含10U DNase I的酶溶液,推薦使用的DNase I,D7076),室溫消化15分鐘。消化結(jié)束后,不要離心,直接加入500μl洗滌液II,進(jìn)入使用說明的步驟5進(jìn)行操作。
本試劑盒提供的所有試劑和耗材都是RNase-free,操作時應(yīng)小心,避免被污染。所有自行準(zhǔn)備的試劑和耗材也都應(yīng)是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜,然后高溫高壓**并烘干。操作時應(yīng)避免對著樣品或所使用的試劑盒耗材呼氣或說話,以防RNase污染。建議戴一次性口罩操作。
對于操作環(huán)境中RNA酶的去除,推薦使用生產(chǎn)的RNase and DNase
Away (XY0123)以去除實驗桌面上或其它接觸面上的RNase。
使用凍存的細(xì)胞或組織抽提RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因為在細(xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會被釋放出來并剪切樣品中的RNA。對于組織樣品,推薦使用生產(chǎn)的RNALater?動物組織RNA穩(wěn)定保存液(XY0118)進(jìn)行保存以保證樣品RNA的完整性。
本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。
結(jié)合液、洗滌液中含有乙醇,使用后須旋緊瓶蓋以防揮發(fā),并須按照易燃試劑的相關(guān)規(guī)范進(jìn)行存放和使用。
本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或**,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的**和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。