單克隆抗體中建立ELISA方法的注意事項(xiàng)

如何利用ELISA篩選以及ELISA方法操作的注意事項(xiàng)，下面我先起個(gè)頭吧，談?wù)勎业膫€(gè)人經(jīng)驗(yàn)：）

ELISA，全稱酶聯(lián)**吸附實(shí)驗(yàn)，主要利用的是抗原抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)，可分為直接法、間接法、雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法等。下面以間接法為例進(jìn)行介紹：

1、方陣ELISA。用途：①融合前后確定鼠血清中抗體效價(jià)；②拿到單抗腹水后，需要建立ELISA方法時(shí)首先要確定包被原及抗體的*佳工作濃度。

經(jīng)典的方陣ELISA：將抗原和抗體各自稀釋成不同梯度濃度，結(jié)果OD值P/N>2的均判為陽(yáng)性，選取OD值在1.0左右的那個(gè)Ag-Ab濃度為*佳工作濃度，其主要原因與酶標(biāo)儀靈敏度有關(guān)。

但是，對(duì)于抗原抗體而言，由于它們被稀釋成不同濃度，那么在理論上，每個(gè)抗原稀釋度情況下，總有一個(gè)抗體的稀釋度其OD值在1.0左右，那么到底選取哪一個(gè)OD值1.0左右的好呢？這就需要同時(shí)用**做個(gè)抑制來(lái)看，哪個(gè)濃度下抑制情況好，就取哪個(gè)抗原抗體濃度做工作濃度。