如何用ELISA評(píng)價(jià)抗血清的效價(jià)

ELISA一般用來定性，如果定量就很麻煩。比如你所提到的問題。
對(duì)照血清可形成梯度，是因?yàn)閷?duì)照血清與包板的抗原量在所檢測(cè)的范圍內(nèi)呈線性；待檢血清不呈線性，*有可能就是該血清與包板的抗原量不匹配。
用ELISA定量，首先應(yīng)該做一下方陣ELISA，用不同的抗原量包板，以不同的抗體量稀釋，先找到合適的抗原量，即在此抗原量下，抗體隨著不同的稀釋度，其OD是呈線性下降的。如果想用對(duì)照血清，應(yīng)以同樣的方法找到適合對(duì)照血清的包板抗原量。如果兩者的抗原量能匹配就*好了，如果不匹配就找到*相近的抗原量包板。這些準(zhǔn)備工作做好了才應(yīng)該開始你現(xiàn)在的工作。

做間接法測(cè)抗體的過程中，包被了抗原后，后面加等量的一抗和二抗，加100ul和200ul有差異嗎，我的理解：加200ul一抗肯定比加100ul一抗和抗原結(jié)合的多，那這樣加等量的二抗后，結(jié)合的二抗也多，也就是酶也多，那這樣催化底物不就多了嗎，按照陽性/陰性大于2.1的算法，加200ul一抗的結(jié)果應(yīng)該比100ul的OD值大啊，是這樣嗎？