轉(zhuǎn)基因擬南芥重金屬含量和種子萌發(fā)率的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)試劑

CdSO₄，Na₃AsO₄，HNO₃ : HClO₄ (10:1，v/v)混合液，1/2 MS培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

烘箱，研缽，SB-01原子吸收光譜儀(AAS，SOLAAR-M6，Thermo Jarrell Ash Co. (USA))，生長(zhǎng)室

實(shí)驗(yàn)材料

野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 轉(zhuǎn)基因擬南芥重金屬含量的測(cè)定

  1) 用500 uM CdSO₄和500 uM Na₃AsO₄處理盆栽的野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥植株使得土壤中Cd和As的*終濃度分別為30.3 mg Cd/kg soil和22.7 mg As/kg soil。
  2) 處理4 days后，將植株從花盆中小心取出(盡量不傷害根部)，用流水沖洗5min，然后再用去離子水洗凈后，分成根葉部(根 蓮座葉)和莖部。
  3) 于105℃下殺青10 min，60-70℃下烘至恒重。
  4) 至少300 mg干樣品粉碎后，用HNO₃：HClO₄ (10：1，v/v)混合液消解15 min
    5)   然后用SB-01原子吸收光譜儀(AAS，SOLAAR-M6，Thermo Jarrell Ash Co. (USA))測(cè)定重金屬含量。

2. 轉(zhuǎn)基因擬南芥種子萌發(fā)率和根長(zhǎng)度測(cè)定

  1) 將擬南芥種子如前述方法**后，整齊地鋪于含不同種類(lèi)和不同濃度的重金屬的1/2 MS培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)室中培養(yǎng)60 hr時(shí)對(duì)種子的萌發(fā)情況拍照。對(duì)于種子萌發(fā)率測(cè)定實(shí)驗(yàn)，將種子鋪于用不同種類(lèi)和不同濃度的重金屬溶液濕潤(rùn)的濾紙上，生長(zhǎng)室中培養(yǎng)60 hr時(shí)計(jì)算種子的萌發(fā)率。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)至少萌發(fā)50粒種子左右。

  2) 根長(zhǎng)度的測(cè)定：將擬南芥種子**后，于1/2 MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)3-7 days后，轉(zhuǎn)移到含不同種類(lèi)和不同濃度的重金屬的1/2 MS培養(yǎng)基上，繼續(xù)培養(yǎng)7-12days后，拍照，測(cè)量根長(zhǎng)度和根數(shù)目。