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一：對(duì)膠回收：
1. 用干凈的刀片切取含DNA片段的瓊脂糖凝膠（100 mg左右，盡可能多地把多余的膠切除，否則會(huì)影響回收效率），放入一干凈的1.5 mL塑料離心管（自備）中稱(chēng)重，按重量比為1：2的比例加入通用溶膠液2.0 (0.1 g的瓊脂糖凝膠需要加入0.2mL的通用溶膠液2.0)。如果瓊脂糖凝膠的濃度大于2%，則需要按1：3的比例加入通用溶膠液2.0溶解膠塊。
2. 50℃保溫10分鐘使膠完全溶化，每隔2-3分鐘振蕩數(shù)次以促進(jìn)瓊脂糖凝膠的溶化。如果片段長(zhǎng)度在300bp以下，建議不要50℃保溫，而是延長(zhǎng)溶膠時(shí)間，以免DNA變性，影響回收率。
3. 在等待期間，活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室溫放置2分鐘，然后12,000 rpm離心2分鐘，倒棄穿透液，再將吸附柱套上收集管后待用?；罨蟮碾x心吸附柱必須在當(dāng)天使用。
4. 在上柱前，在溶化的膠中加入相當(dāng)于膠塊體積1/2的異丙醇（對(duì)100mg膠塊，加50uL），快速振蕩10秒混勻。
5. 將溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套上收集管，靜置3分鐘。注意：靜置有助于DNA與離心吸附柱的硅膠膜結(jié)合。本產(chǎn)品提供的離心吸附柱的*大上樣體積為0.8mL，若溶膠液的總體積大于0.8mL，一次加不完，可以分多次將溶液加入到吸附柱中。
6. 12000-15000 g離心1分鐘，倒掉收集管中的穿透液。
7. 加入0.7mL通用洗柱液于離心柱中，12000-15000 g離心1分鐘，倒棄收集管中的廢液。如果回收的DNA用于鹽敏感實(shí)驗(yàn)（如平末端連接或直接測(cè)序）,建議加入通用洗柱液后靜置2-5分鐘再離心。
8. 12000-15000 g離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體。
9. 將離心柱吸附置于一新的干凈的塑料離心管（自備）中，懸空加入50 uL DNA洗脫液于離心吸附柱硅膠膜的中央。注意：如果回收的DNA用于測(cè)序，則可用重蒸水（自備）洗脫DNA。DNA洗脫液可以也用TE替代，但用水或TE替代DNA洗脫液3.0時(shí)，回收率可能稍有降低。
10. 靜置3分鐘后12000-15000 g離心1分鐘。
11. 離心管底部所得溶液即為純化的DNA溶液，可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者放-20℃長(zhǎng)期保存。如果將所得DNA溶液再次加回到離心吸附柱中，重復(fù)洗脫過(guò)程，將得到更多的DNA。
12. 用電泳方法或測(cè)OD方法確定回收所得DNA的濃度，1 OD260對(duì)應(yīng)的濃度是50ug/mL（對(duì)雙鏈DNA）或40ug/mL（對(duì)單鏈DNA），純凈DNA的OD260/OD280比值應(yīng)該在1.8左右。注意：OD讀數(shù)跟pH相關(guān)，如果用自備的重蒸水洗脫，OD值會(huì)低于在DNA洗脫液3.0中測(cè)定的數(shù)字。
二：PCR或其他酶反應(yīng)回收
13. 直接在PCR或其他酶反應(yīng)管中加2倍體積的通用溶膠液2.0，振蕩10秒混勻。如果PCR反應(yīng)中使用了石蠟，需要預(yù)先去除。
14. 活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室溫放置2分鐘，然后12,000 rpm離心2分鐘，倒棄穿透液，再將吸附柱套上收集管后待用?；罨蟮碾x心吸附柱必須在當(dāng)天使用。
15. 在上柱前，在反應(yīng)液和溶膠液的混合液中加入相當(dāng)于反應(yīng)體積1/2的異丙醇（對(duì)100uL的反應(yīng)液，加50uL），快速振蕩10秒混勻。
16. 直接進(jìn)入上面膠回收操作的第5步并進(jìn)行后面的操作。
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