如何檢測(cè)細(xì)胞活力

在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中會(huì)有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞，活細(xì)胞所占總細(xì)胞的比例叫做細(xì)胞活力，細(xì)胞的活力能夠更好的體現(xiàn)細(xì)胞的狀態(tài)。

在組織中分離細(xì)胞時(shí)，為了了解分離的過(guò)程對(duì)細(xì)胞是否有損傷，一般都會(huì)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行活力檢查。在細(xì)胞復(fù)蘇的過(guò)程中為了更好的判斷凍存和復(fù)蘇的效果，一般會(huì)通過(guò)細(xì)胞活力檢查的方式進(jìn)行判斷。

細(xì)胞懸液制備后，常用活體染料臺(tái)盼藍(lán)對(duì)細(xì)胞染色，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

那么臺(tái)盼藍(lán)是如何進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的呢？

當(dāng)正常細(xì)細(xì)胞膜完整時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色。當(dāng)喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞胞膜通透性增加，臺(tái)盼藍(lán)能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色（藍(lán)色）。

正確操作步驟：

1. 配制4%臺(tái)盼藍(lán)母液：稱取4g臺(tái)盼藍(lán)，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100mL，用濾紙過(guò)濾，4℃保存。使用時(shí)用PBS稀釋至0.4%。

2. 胰酶消化貼壁細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液，并作適當(dāng)稀釋（106 cells/mL）。

3. 取少量細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合，輕輕吹打混勻，染色2~3min。

4. 顯微鏡下觀察，死細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無(wú)光澤；活細(xì)胞保持正常形態(tài)，無(wú)色透明有光澤。若需計(jì)算活細(xì)胞率則將染色的細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

計(jì)算公式：活細(xì)胞率（%）= 活細(xì)胞總數(shù)/（活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)）×100%

注意事項(xiàng)：臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí)，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。否則，部分活細(xì)胞也會(huì)著色，會(huì)干擾計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。