非凍型血液DNA保存液
非凍型血液DNA保存液低于1.7,考慮RNA降解,*常見的原因是RNA酶去除不徹底。
建議你1.EP管和tip用DEPC水泡,如果來不及也可以買現(xiàn)成的。
2.提取時注意低溫,防止RNA降解。
3.洗滌用的75%酒精用DEPC水配制,*后融解RNA的水也應(yīng)是DEPC水,或去RNA酶水。
4.提取的RNA盡快轉(zhuǎn)錄成cDNA,-70度保存時間不宜過長(一般不超過一個月)。
非凍型血液DNA保存液提RNA提取秘訣:
1.提取RNA過程應(yīng)該盡量快,不要太過仔細(xì),以減少RNA的降解
2.在吸取上清液時要小心,離心管盡量不要抖動和傾斜,保持其從離心機(jī)里拿出來的角度吸取,加入異丙醇的那一步要尤其小心,上清液不要貪多
3.非凍型血液DNA保存液干燥時不要太過
4.你跑的電泳是不是普通的瓊脂糖凝膠電泳?這個結(jié)果不是很準(zhǔn)確,因為在跑膠的過程當(dāng)中RNA也會降解,但并不一定你提取的RNA效果不好,一般情況下跑出來的電泳結(jié)果有3條帶,2000bp,1000bp,100多的位置各有一條帶,分別是28s,18s,5s,如果5S很亮,表示RNA降解
5.提完的RNA可以做反轉(zhuǎn)錄,非凍型血液DNA保存液然后用管家基因檢測,只要能擴(kuò)出明亮的條帶即對你的實驗沒有影響。注意:在用管家基因檢測時應(yīng)增加循環(huán)數(shù),以檢測是否有DNA污染。